淺談蛋白保存

作為實(shí)驗(yàn)室的"打工人"，相信大家都經(jīng)歷過(guò)這樣的崩潰時(shí)刻：好不容易純化出來(lái)的蛋白，放冰箱幾天后居然沉淀了！或者不同批次的蛋白活性忽高忽低，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)根本沒(méi)法看...今天我們就來(lái)聊聊這個(gè)讓老師們頭疼的蛋白質(zhì)保存問(wèn)題。

一、為什么蛋白質(zhì)這么"嬌氣"？

蛋白質(zhì)就像是個(gè)精致的樂(lè)高模型，靠著氫鍵、鹽鍵這些"膠水"維持著復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)。但隨便來(lái)個(gè)酸堿、高溫或者劇烈震蕩，這個(gè)模型就會(huì)散架。更氣人的是，純化后的蛋白比粗提物還要"作"，動(dòng)不動(dòng)就變性給你看。

二、保存蛋白質(zhì)的五大黃金法則

1. 低溫保存：但別太低

- 4℃適合短期（1周內(nèi)），但記得加抗菌劑

- -20℃是常規(guī)選擇，但要注意凍融損傷

- -80℃長(zhǎng)期保存最佳，但有些蛋白反而怕凍

小貼士：像羧肽酶這種"玻璃心"蛋白，凍一次就變性；而有些酶凍融后活性反而增強(qiáng)，簡(jiǎn)直是"抖M"體質(zhì)。

2. 分裝是個(gè)技術(shù)活

- 建議50-100μl/管（土豪實(shí)驗(yàn)室可以任性）

- 標(biāo)記一定要清楚！別問(wèn)我是怎么知道的...

- 用過(guò)的蛋白放4℃不要超過(guò)一周，對(duì)于較為重要的實(shí)驗(yàn)探索，最好用新鮮配置或未經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融的蛋白質(zhì)。

3. 濃縮才是精華

- 濃度＜1mg/ml的蛋白容易“自暴自棄"（解聚或吸附）

- 疏水蛋白特別"粘人"，喜歡抱管子不放

- 酶溶液至少要＞1%濃度

4. 速凍速融要快準(zhǔn)狠

- 液氮速凍較理想，干冰-乙醇浴也能湊合

- 融化時(shí)37℃水浴快速搞定

- 千萬(wàn)別學(xué)我那個(gè)把蛋白放室溫慢慢融化的師弟...

5. 添加劑的選擇困難癥

緩沖液：

- pH7-8的Tris或PBS最保險(xiǎn)

- 鹽濃度0-150mM為宜

保護(hù)劑全家桶：

- 甘油（10-50%）：蛋白質(zhì)的"防凍液"

- DTT：對(duì)抗氧化損傷的"抗氧化劑"

- 蛋白酶抑制劑：防"自相殘殺"

- 疊氮鈉：有毒但有效的"防腐劑"（做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的請(qǐng)繞道）

三、保存方法選擇指南

1. 短期（＜1周）：

- 4℃+過(guò)濾除菌

- 記得定期檢查

2. 長(zhǎng)期：

- -80℃是較好的

- 凍干保存較穩(wěn)定（但有些蛋白復(fù)溶困難）

四、來(lái)自老法師的忠告

1. 新純化的蛋白先做個(gè)小樣測(cè)試穩(wěn)定性

2. 重要蛋白建議多種條件平行保存

3. 記錄！記錄！記錄?。▌e問(wèn)我為什么強(qiáng)調(diào)三遍）

4. 定期檢查保存蛋白的活性和濃度

最后提醒：沒(méi)有放之四海而皆準(zhǔn)的保存方法，關(guān)鍵要了解你家蛋白的"脾氣"。多查文獻(xiàn)，多試條件，才能找到適合的保存方案。祝大家的蛋白都能"長(zhǎng)命百歲"！

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